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nanoComposix 使用金納米殼提高靈敏度方法

發布時間:2018/8/23      點擊次數:1851

nanoComposix是世界先進的精密工程和高度特征化納米粒子制造商。我們的使命是幫助我們的客戶將納米技術產品推向市場。我們的多學科技術團隊提供快速原型設計,表征,集成和擴展解決方案,以加速各種應用領域的研發和商業化,包括生物診斷,局部治療,納米醫學,抗菌涂層和色彩工程。

自2004年以來,nanoComposix已為數千名客戶提供單分散和非團聚金屬和金屬氧化物納米材料。數百種不同的材料,尺寸,形狀和表面可供選擇,我們已經生產了2000多種定制的核/殼,生物功能化,熒光和磁性納米復合材料,以滿足客戶的要求。NanoComposix生產了NIST納米銀參考材料,我們的顆粒已被用于400多篇同行評審的出版物中。我們所有的材料都提供分析證書,包括電子顯微鏡,流體動力學直徑和每批次的光學數據,以保證產品符合規格。合同制造的規模從小燒杯到數千升不等。用于醫療設備和臨床試驗的納米材料在我們的ISO13485和cGMP兼容潔凈室設施中生產。通過利用我們*的納米材料庫,我們的目標是幫助客戶快速將納米技術產品從概念轉化為商業化。

側流免疫分析法是一種自帶的、便攜式的診斷儀器,使用方便,速度快,價格低廉。橫向流動測試裝置可在常溫下儲存,有較長的時間。 保質期,并提供診斷結果,沒有樣品處理或額外的設備,使這種格式是理想的護理點和現場診斷。數以億計的橫向f 每年都會使用低含量的分析方法來檢測各種各樣的分析物質。

常見的橫向流動分析配置使用膠體金納米球來提供讀數,當在膜上某一特定位置綁定時,這種讀數顯示為一條紅線(圖1)。的確有。 也有一條陽性對照線來表示測試的有效性。紅色來源于金納米粒子對綠色和藍光的吸收。因為金納米粒子的光學性質 S與大小和形狀有關,橫向流動檢測的靈敏度受來自小(典型的直徑為40 nm)的報告粒子的信號強度的限制。分析靈敏度 TE檢測至關重要。如果不能達到臨床相關的分析范圍,橫向流動帶將不會有商業市場。

NanoComposix已經開發出一種金納米殼,其橫向流動測試的靈敏度通常是40 nm直徑金膠體的6至20倍。納米復合材料的生物準備度150 nm 金納米殼是一種等離子體報道納米粒子,由一個120 nm的二氧化硅核組成,包覆著一層薄的(12-18納米)金殼。二氧化硅內部降低了相對于SO的粒子密度。 蓋子金納米粒子,允許通過橫向流動膜的流量比150納米固體金球更好。金納米殼具有很大的消光截面(即極 強烈的顏色)的峰值消光波長,這是一個函數的直徑的核心和厚度的外殼。峰消光大于40 nm金球形納米粒子的35倍。 蒂克利斯(圖2)。由于金納米殼層的每粒子消光截面大于40納米金粒子,因此在測試線上顯示結果所需的結合事件較少。 Teral流動試驗此外,只需要對現有協議進行輕微修改,因為金納米殼具有與球形金納米粒子相同的金表面。

 

圖2.圖顯示,150 nm的Bi-Ready金納米殼吸收光,每粒子消光系數大于40 nm金球形納米粒子的35倍。40 nm高的小瓶 D納米顆粒(A)和金納米殼(B)在相同的顆粒濃度下,突出了顏色強度的差異。

 

使用膠體金納米球的橫向流動分析會產生一條紅色的測試線。金納米殼產生了一條高對比度的藍灰色線,眼睛可以清楚地看到。增加20倍 當檢測到人類激素(圖3)時,使用金納米殼與40納米金相比,獲得了靈敏度。在各種各樣的直接和競爭中,相似的靈敏度增加了。 包括唾液皮質醇、促甲狀腺激素、肌鈣蛋白I、伯氏桿菌、盤尾絲蟲病、淋巴絲蟲病、瘧疾、乙型肝炎等。

納米殼制造:

 

納米殼是利用膠體化學技術在納米復合材料上制造的。單分散均勻的120 nm直徑二氧化硅芯采用兩步法包覆薄(12-18 nm)金殼層。 埃斯。首先,小的金納米粒子被綁定到二氧化硅表面。這些小種子顆粒會長大,直到它們結合成一個完整的外殼(圖4)。后的粒子 窄粒度分布對定量測定的重現性有重要意義。殼生長的多種子法幾乎消除了結晶度和晶面,這是一個典型的現象。 當生長更大的金納米粒子時,這是個問題。納米復合材料大量制造納米殼(20升,20 OD),足以生產出成千上萬的橫向Flo。 W測試。通過EDC/Sulfo-NHS鍵合化學,納米殼層通過羧基表面功能化,從而與抗體形成共價結合。經功能化后,納米粒子為e。 干洗入水中(10倍體積清洗)

 

納米殼表征:

每一批納米殼都具有廣泛的特性,以確保高度的批次一致性.由于等離子體共振,金殼層中電子的集體振蕩,金納米殼層。 L_s與入射光強相互作用。顆粒的“顏色”取決于核的大小和外殼的厚度的比率。這是監測使用紫外-可見光譜。這,這個,那,那個 紫外-可見光譜是金納米殼的主要表征之一.在相同大小的核上薄殼將有一個較長的峰值消光波長。較厚的殼會有較短的w。 峰高。對于橫向流動應用,核的尺寸和殼層的厚度已經被優化,以大限度地對比度在可見和近紅外區域的光譜。* 在可見光中觀察到h條對比側向流線,在紅外中通過適當的讀取器可獲得甚至更高的信號。

每個金納米殼批次都提供了一份全面的分析證書(圖5)。用透射電子顯微鏡(TEM)測定了納米粒子的平均偏差和標準差。 地獄直徑。用TEM計算顆粒濃度,用ICP-MS測量金濃度。根據透射電鏡確定的殼層厚度,可以計算出每粒金的質量。 采用LATED和ICPMS濃度計算顆粒濃度和比表面積。用動態光散射法測量溶液中的水動力顆粒尺寸和水動力特性。 在TEM確定直徑的20 nm范圍內的C直徑驗證了粒子在溶液中沒有聚集。用dis法測定了粒子的質量濃度。 金殼溶液及溶液中金離子濃度的測定。粒子表面被硫辛酸功能化,硫辛酸通過二硫醇b緊密結合在顆粒表面上。 得到羧基功能化表面。由于微粒懸浮在弱碳酸鹽緩沖液中,其pH變化在5至8之間,但會立即與任何稀釋劑的pH值相匹配。 正在使用中。Zeta電位測量粒子的表面電荷,在中性pH值下,由于羧基表面的作用,Zeta電位為強負值。物理的廣泛表征 納米殼層的化學性質保證了釋放的納米殼層具有高度的可重復性。

 

納米殼結合:納米顆粒/抗體結合物是橫向流動分析中重要的成分之一。對于金納米殼,用共價結合化學來連接抗體。 或者其他粒子表面的靶向劑。用EDC/Sulfo-NHS化學將懸浮在低離子強度緩沖液中的純化抗體結合到羧基表面。這構成c 抗體與顆粒表面之間的二價酰胺鍵。簡單地說,羧基金納米殼被Edc和sulfo-nhs試劑激活,從而產生氨基反應的nhs酯終端。 在……上面在激活后,粒子與抗體混合,并被允許孵育。然后,NHS酯與抗體中的游離胺反應,形成酰胺鍵與配體結合。 黃金表面。隨后,加入過量游離胺的淬火劑,使任何殘留的nhs酯失活,并在再懸浮前對粒子進行三次離心和洗滌。 共軛稀釋劑詳細的抗體純化和結合協議可在我們的網上查閱。

 

與傳統的被動吸收技術相比,共價結合法具有許多優點,用于制備共軛物:

 

共軛穩定性:共軛穩定:共軛通常是更穩健的,并增加了穩定性在更廣泛的樣本矩陣和緩沖器。我們有很多客戶不能進行例子。 Ep是一種穩定的無源吸收共軛物,但與共價結合成功。具體優勢包括:

 

對抽提條件下的細菌檢測具有更強的抵抗力。

 

在廣泛的尿液條件下有更好的共軛釋放和穩定性

 

提高相分離的鹽穩定性

 

與被動吸附的共軛物相比,在含有大量洗滌劑和鹽的緩沖液中穩定。

 

對于抗體(如IgM)的結合非常有用,而這些抗體很難用被動的方法進行。

抗體比例:通過改變抗體與顆粒的比例和反應時間,可以控制每??贵w的數量。這對于競爭性分析尤其重要。 調整每個粒子的抗體數量可以將檢測的動態范圍帶入臨床相關的窗口。用于直接夾心試驗,控制抗體數量。 也很重要。由于具有快速結合動力學的高親和力抗體,每粒抗體的數量較低是zui佳的,因為即使一種與結合抗原結合的抗體也有較高的概率。 綁定到測試線的完整性。然而,如果抗體的動力學很慢,或者抗體結合的親和力較低,則每個粒子需要更多的抗體,以確保存在結合前夕。 在納米粒子共軛之前的測試線上NT是超過測試線。對于需要大分析靈敏度的低分析物濃度,重要的是要有盡可能多的納米粒子。 盡可能地與能在測試線上結合的結合抗原結合。例如,如果一個樣品中只有100個分析物,而且每個納米粒子共軛物都有一種抗體,即100粒子。 ES可能在測試線上綁定。然而,如果每個共軛物都有許多抗體,那么多個分析物質就會結合到每個粒子上,從而減少納米粒子的總電位數。 在測試線處綁定。對于每種檢測,都有一個*的抗體負載率,需要通過經驗來確定。

在我們的手中,共價結合幾乎總是比生理吸附在競爭性試驗中更好。

 

檢測抗體為分析物時的較好結果

 

鏈霉親和素/生物素法測定效果更好

 

縮短開發時間:共價結合化學重要的優點之一是,與物理結合法相比,它能更快地產生與共價結合的功能共軛物。 由于鹽和pH條件不一定要經過掃掠才能得到功能共軛物。這大大減少了篩選識別組合所需的數十個抗體對所需的時間。 這將用于進一步的分析開發。

 

每條納米殼成本

 

從歷*看,產生與共價結合的結合物是昂貴的,限制了它們在低邊緣免疫檢測中的應用。在納米復合材料上,我們的規?;圃旃に囀刮覀兡軌蛱峁?羧基功能化納米殼的OD-mL價格僅為0.75美元(相當于每升1 OD的750美元,或20 OD的15美元),低于許多供應商對標準金納米顆粒的收費。然而,c Ost/OD并不是確定每條帶鋼成本的唯yi參數。金納米殼更大,每個粒子的OD值更高。通常,我們的客戶需要O上的納米殼數的3-5倍。 d基時與40 nm金顆粒進行后優化測定,以使靈敏度大化。雖然與球形黃金相比,這確實增加了每條的成本,但在大多數情況下, 分析靈敏度的提高證明了每條要求較高OD值的額外成本是合理的。更大數量的采購可以實現進一步的成本節約。

 

批次可再生產與商業供給

個案研究

對于商業生產來說,必須有較低的批次到批次的可變性,以便在生產過程中不需要對檢測方法進行修改。這對于半定量或 定量分析,提供超過“是/否”的答案。批處理-批處理可重復性研究已經進行了3批納米殼在內部和我們的客戶。典型L Ot-to-lot變量數如圖6所示。根據要求,可生產多達40萬ODmL的批量,減少了不同批次中小差異的影響。所有的批次都是用 符合ISO 13485標準的SOP和批記錄。我們現場的質量審核可根據要求提供。

金納米殼被集成到數十個橫向流動分析系統中。在所有情況下,在穩定性、重現性、動態范圍或靈敏度方面都有明顯的優勢。A數o 下面是描述金納米殼的優點的案例研究。

激素檢測:納米殼被用在激素檢測中,150納米金納米殼比40納米金達到8X的檢測下限,這對我來說是必需的。 確定臨床相關范圍。FDA正在審查一份包含數據的510 k應用程序。

唾液皮質醇:用40 nm金納米球和150 nm直徑的納米殼進行唾液皮質醇測定。這是一種半定量競爭分析,其中動態范圍很大。 要求跟蹤日基線和皮質醇峰值。靈敏度不是一個問題,因為40納米微球和納米殼都可以檢測到低的臨床相關范圍0.5納克/毫升。 然而,金納米殼層的動態范圍增加了10倍。

肌鈣蛋白I:用金納米殼測定血清中肌鈣蛋白I的靈敏度比40 nm金高10倍。

 

瘧疾:在一項由合作伙伴開發的瘧疾試驗中,敏感性提高了8倍。

通過保留傳統的金納米圈探測器的所有優點,并大大增加每一個綁定事件的對比度,金納米殼提供了一個簡單的和st。 提高橫向流動靈敏度的前饋方法。這種敏感性的提高使得新的測試能夠獲得臨床相關的分析物質濃度,增加了dna。 麥克風范圍或,通過交易速度的敏感性,可以減少時間的讀出。共價偶聯到顆粒表面,減少了測定的時間,增加了內翻物的共軛穩定性。 樣本矩陣的安全性當與廉價的移動閱讀器提供定量分析,金納米殼有潛力,使新一代的商業橫向流動分析。

 

 

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