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cytoskeleton Biochem試劑盒說(shuō)明書

更新時(shí)間:2018-08-17      點(diǎn)擊次數(shù):3150

 

Cytoskeleton,Inc。很高興為藥物篩選,信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產(chǎn)品。我們專注于生產(chǎn)純化蛋白質(zhì)和易于使用的試劑盒,以研究生物化學(xué)和細(xì)胞過(guò)程。我們的試劑盒可用于少量樣品,用于基礎(chǔ)研究或小屏幕(Biochem Kits™),也可用于大屏幕的高通量樣品(CytoDYNAMIX Screens™)。

除了我們現(xiàn)有的產(chǎn)品,我們還在產(chǎn)品線中為微管,微管蛋白,運(yùn)動(dòng)蛋白,小G蛋白效應(yīng)物,GAP,GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務(wù)。

 

Cytoskeleton的Biochem Kits™是用于分析細(xì)胞骨架生物化學(xué)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的不同方面的綜合試劑盒。這些工具包通常構(gòu)成出版物中圖形的基礎(chǔ),請(qǐng)查看引文標(biāo)簽中的示例。該試劑盒附帶了分析所需的所有試劑以及如何使用它們的詳細(xì)說(shuō)明,因此您可以在準(zhǔn)備好試劑盒后立即進(jìn)行分析!

 

· 測(cè)量蛋白質(zhì)和藥物對(duì)肌動(dòng)蛋白聚合/解聚的影響。

· 發(fā)現(xiàn)和表征肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白(ABPs)。

· 在細(xì)胞或組織裂解物中定量G-肌動(dòng)蛋白(單體)對(duì)F-肌動(dòng)蛋白(聚合物)。

· 將設(shè)置時(shí)間從幾個(gè)月縮短到幾天。

許多出版物引用了在論文的材料和方法部分中使用Cytoskeleton的試劑盒。通常,引文與圖形或圖像形式的特定結(jié)果相關(guān)聯(lián),這有助于您,作者,您的發(fā)現(xiàn)。這表明套件可在短時(shí)間內(nèi)生成出版物質(zhì)量數(shù)據(jù),從而有助于提高工作效率。肌動(dòng)蛋白試劑盒的引用示例如下所示。個(gè)別產(chǎn)品頁(yè)面上提供了更多引文。??

 

肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析Biochem試劑盒:兔骨骼肌肌動(dòng)蛋白(Cat。#BK001)

Takeshita,N.,Ohta,A。和Horiuchi,H。(2005)。CsmA是一種具有肌球蛋白運(yùn)動(dòng)樣結(jié)構(gòu)域的V類幾丁質(zhì)合酶,通過(guò)與構(gòu)巢曲霉中肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的直接相互作用進(jìn)行定位。摩爾。生物學(xué)。細(xì)胞16,1961-1970。

Banerjee,J。和Wedegaertner,PB(2004)。鑒定PDZ-RhoGEF中的新序列,其介導(dǎo)與肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的相互作用。摩爾。生物學(xué)。Cell 15,1760-1775。

Kumar,N.,Zhao,P.,Tomar,A.,Galea,CA和Khurana,S。(2004)。絨毛蛋白與磷脂酰肌醇4,5-二磷酸的結(jié)合調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架。J. Biol。化學(xué)。279,3096-3110。

Torgler,CN,Narasimha,M.,Knox,AL,Zervas,CG,Vernon,MC和Brown,NH(2004)。Tensin穩(wěn)定果蠅中的整合素粘合劑接觸。開發(fā)。Cell 6,357-369。

Oliver,CJ,Terry-Lorenzo,RT,Elliott,E.,Bloomer,W??A,Li,S.,Brautigan,DL,Colbran,RJ和Shenolikar,S。(2002)。將蛋白磷酸酶1(PP1)靶向肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架:neurabin I / PP1復(fù)合物調(diào)節(jié)細(xì)胞形態(tài)。摩爾。細(xì)胞。生物學(xué)。22,4690-4701。

Hildebrand,JD和Soriano,P。(1999)。Shroom是一種含有PDZ結(jié)構(gòu)域的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白,是小鼠神經(jīng)管形態(tài)發(fā)生所必需的。細(xì)胞99,485-497。

肌動(dòng)蛋白聚合生物化學(xué)試劑盒(熒光形式):兔骨骼肌肌動(dòng)蛋白(Cat。#BK003)

Takamiya,R.,Takahashi,M.,Park,YS,Tawara,Y.,F(xiàn)ujiwara,N.,Miyamoto,Y.,Gu,J.,Suzuki,K。和Taniguchi,N。(2005)。神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中突變的Cu,Zn-SOD的過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞骨架改變。上午。J. Physiol。288,C253-259。

Kumar,N.,Tomar,A.,Parrill,AL和Khurana,S。(2004)。功能性解剖和分子表征的鈣敏感肌動(dòng)蛋白封閉和肌動(dòng)蛋白解聚位點(diǎn)在絨毛蛋白。J. Biol。化學(xué)。279,45036-45046。

Fontao,L.,Geerts,D.,Kuikman,I.,Koster,J.,Kramer,D。和Sonnenberg,A。(2001)。plectin與肌動(dòng)蛋白的相互作用:通過(guò)肌動(dòng)蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域的二聚化肌動(dòng)蛋白絲交聯(lián)的證據(jù)。J. Cell Sci。114,2065-2076。

Zhai,L.,Zhao,P.,Panebra,A.,Guerrerio,AL和Khurana,S。(2001)。絨毛蛋白的酪氨酸磷酸化調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的組織。J. Biol。化學(xué)。276,36163-36167。

Blader,IJ,Cope,MJ,Jackson,TR,Profit,AA,Greenwood,AF,Drubin,DG,Prestwich,GD和Theibert,AB(1999)。GCS1是釀酒酵母中的Arf鳥苷三磷酸酶活化蛋白,是體內(nèi)正常肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架組織所必需的,并且在體外刺激肌動(dòng)蛋白聚合。摩爾。生物學(xué)。Cell 10,581-596。

肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析Biochem試劑盒:人血小板肌動(dòng)蛋白(Cat。#BK013)

Gohla,A.,Birkenfeld,J。和Bokoch,GM(2005)。Chronophin是一種新型HAD型絲氨酸蛋白磷酸酶,可調(diào)節(jié)cofilin依賴性肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué)。納特。細(xì)胞生物學(xué)。7,21-29。

Falcon-Perez,JM,Starcevic,M.,Gautam,R。和Dell'Angelica,EC(2002)。BLOC-1,一種新的復(fù)合物,含有蒼白素和弱蛋白,參與黑素體和血小板致密顆粒的生物發(fā)生。J. Biol。化學(xué)。277,28191-28199。

Zhai,L.,Zhao,P.,Panebra,A.,Guerrerio,AL和Khurana,S。(2001)。絨毛蛋白的酪氨酸磷酸化調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的組織。J. Biol。化學(xué)。276,36163-36167。

Leung,CL,Sun,D.,Zheng,M.,Knowles,DR and Liem,RK(1999)。微管肌動(dòng)蛋白交聯(lián)因子(MACF):dystonin和肌營(yíng)??養(yǎng)不良蛋白的雜合體,可與肌動(dòng)蛋白和微管細(xì)胞骨架相互作用。J. Cell Biol。147,1275-1286。

G-Actin / F-actin體內(nèi)檢測(cè)Biochem試劑盒(目錄號(hào)BK037)

Rapier等,2010。癌細(xì)胞Int。10,24

Rapier等。(2010年)。細(xì)胞外基質(zhì)微觀形成驅(qū)動(dòng)結(jié)腸癌細(xì)胞中細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性和Rho A活性的關(guān)鍵變化。癌細(xì)胞10,24。

Meeks,MK,Ripley,ML,Jin,Z。和Rembold,CM(2005)。熱休克蛋白20介導(dǎo)的力抑制毛喉素放松豬頸動(dòng)脈。上午。J. Physiol。288,C633-639。

Zhang,W.,Wu,Y.,Du,L.,Tang,DD and Gunst,SJ(2005)。通過(guò)N-WASp激活A(yù)rp2 / 3復(fù)合物是肌動(dòng)蛋白聚合和平滑肌收縮所必需的。上午。J. Physiol。288,C1145-1160。

Chen,G.,Raman,P.,Bhonagiri,P.,Strawbridge,AB,Pattar,GR和Elmendorf,JS(2004)。磷脂酰肌醇4,5-二磷酸對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞持續(xù)暴露于胰島素誘導(dǎo)的皮質(zhì)絲狀肌動(dòng)蛋白丟失和胰島素抵抗的保護(hù)作用。J. Biol。化學(xué)。279,39705-39709。

Tang,DD和Gunst,SJ(2004)。小GTP酶Cdc42在平滑肌的收縮刺激期間調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白聚合和張力發(fā)展。J. Biol。化學(xué)。279,51722-51728。

Searles CD,Ide L,Davis ME,Cai H,Weber M(2004)。肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架組織和細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)。Circulation Research 95,488-495。

Tu,Y.,Wu,S.,Shi,X.,Chen,K。和Wu,C。(2003)。Migfilin和Mig-2將細(xì)絲蛋白和肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的細(xì)胞粘連與細(xì)胞形狀調(diào)節(jié)功能聯(lián)系起來(lái)。細(xì)胞113,37-47。

問(wèn)題1:哪種試劑盒是檢測(cè)肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白的*選擇? 

答案1:  Cytoskeleton有兩個(gè)肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析試劑盒,是識(shí)別和表征肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白的理想選擇。一個(gè)試劑盒使用肌肉肌動(dòng)蛋白(Cat。#BK001),另一個(gè)試劑盒使用非肌肉肌動(dòng)蛋白(Cat。#BK013)。兩種測(cè)定均利用共沉淀來(lái)鑒定蛋白質(zhì)是否與單體或絲狀肌動(dòng)蛋白結(jié)合以及蛋白質(zhì)是否具有F-肌動(dòng)蛋白切斷或成束特性。為了檢查與肌動(dòng)蛋白單體結(jié)合的化合物或蛋白質(zhì),含有鏈霉抗生物素蛋白包被的孔的96孔板可以與生物素化肌動(dòng)蛋白復(fù)合(Cat。#AB07)產(chǎn)生肌動(dòng)蛋白單體捕獲蛋白。然后可以將化合物,蛋白質(zhì)或提取物與捕獲蛋白一起溫育,并且可以通過(guò)HRP檢測(cè)系統(tǒng)使用針對(duì)目標(biāo)化合物或蛋白質(zhì)的抗體(或標(biāo)記可以與測(cè)試蛋白綴合)來(lái)顯現(xiàn)結(jié)合。請(qǐng)記住,緩沖液組成也很重要,因?yàn)樗枰望}(約50 mM)并含有CaCl 2(或其他二價(jià)陽(yáng)離子)和ATP以維持肌動(dòng)蛋白單體的穩(wěn)定性。有關(guān)兼容緩沖液的示例,請(qǐng)參閱我們的一般肌動(dòng)蛋白緩沖液配方(Cat。#BSA01-001)。或者,可以用GST標(biāo)記感興趣的蛋白質(zhì)(避免還原劑)并與板綴合,然后與生物素化的肌動(dòng)蛋白一起溫育,并用HRP綴合的鏈霉抗生物素蛋白顯現(xiàn)。

 

問(wèn)題2:當(dāng)我對(duì)感興趣的肌動(dòng)蛋白沒(méi)有可用的芘結(jié)合物(例如心臟,平滑肌或細(xì)胞質(zhì)肌動(dòng)蛋白)時(shí),如何用芘測(cè)定法測(cè)量肌動(dòng)蛋白聚合? 

答案2:  為了檢查未標(biāo)記肌動(dòng)蛋白的聚合,請(qǐng)點(diǎn)擊此處查看使用過(guò)量未標(biāo)記肌動(dòng)蛋白(心肌,平滑肌或細(xì)胞質(zhì))加10%芘標(biāo)記肌肉肌動(dòng)蛋白的聚合方案。芘肌肉肌動(dòng)蛋白不會(huì)以該測(cè)定中使用的濃度自身聚合,因此反應(yīng)依賴于未標(biāo)記的非肌肉肌動(dòng)蛋白形成F-肌動(dòng)蛋白。以這種方式,芘標(biāo)記的肌肉肌動(dòng)蛋白被吸收并聚合以充當(dāng)用于聚合未標(biāo)記的肌動(dòng)蛋白的報(bào)道分子,其以更高的濃度存在。

 

問(wèn)題3:如何從細(xì)胞或組織提取物中測(cè)量G-和F-肌動(dòng)蛋白? 

答案3:  確定細(xì)胞或組織樣本中游離球狀肌動(dòng)蛋白(G-肌動(dòng)蛋白)含量與絲狀肌動(dòng)蛋白(F-肌動(dòng)蛋白)含量的可重復(fù)和準(zhǔn)確的方法是使用F-肌動(dòng)蛋白和G-肌動(dòng)蛋白部分的Western印跡定量。 。一般方法是使F-肌動(dòng)蛋白穩(wěn)定緩沖液中的細(xì)胞或組織均質(zhì)化,然后高速離心以將F-肌動(dòng)蛋白與G-肌動(dòng)蛋白池分離。然后通過(guò)SDS-PAGE分離級(jí)分,并通過(guò)Western印跡定量肌動(dòng)蛋白。終結(jié)果給出了準(zhǔn)確的方法來(lái)確定摻入細(xì)胞骨架的F-肌動(dòng)蛋白與細(xì)胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的G-肌動(dòng)蛋白的比例。細(xì)胞骨架提供了一種簡(jiǎn)單易用的選擇,可用G-肌動(dòng)蛋白/ F-肌動(dòng)蛋白體內(nèi)檢測(cè)試劑盒(Cat。#BK037)定量G-和F-肌動(dòng)蛋白。該試劑盒提供了在不同處理?xiàng)l件下定量細(xì)胞或組織樣品中單體和聚合肌動(dòng)蛋白水平的所有必需試劑。將樣品離心,然后將沉淀(F-肌動(dòng)蛋白)和上清液(G-肌動(dòng)蛋白)溶解于SDS上樣緩沖液中并通過(guò)Western印跡處理。 

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肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析Biochem試劑盒:人血小板肌動(dòng)蛋白

BK013

 

肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析Biochem試劑盒:兔骨骼肌肌動(dòng)蛋白

BK001

 

肌動(dòng)蛋白聚合生物化學(xué)試劑盒(熒光形式):兔骨骼肌肌動(dòng)蛋白

BK003

 

F-actin Visualization Biochem Kit(熒光格式)

BK005

 

G-Actin / F-actin In Vivo Assay Biochem Kit

BK037

 

 

 

肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析Biochem試劑盒:人血小板肌動(dòng)蛋白

 

 

窗體頂端

30-100次分析(Cat。#BK013)

窗體底端

產(chǎn)品用途包括

· 確定蛋白質(zhì)是否與肌動(dòng)蛋白的細(xì)絲或單體結(jié)合。

· 確定蛋白質(zhì)是否捆綁F-肌動(dòng)蛋白

· 測(cè)試與肌動(dòng)蛋白結(jié)合的各種條件(例如適pH)或要求(例如二價(jià)陽(yáng)離子要求)

簡(jiǎn)介
肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白降速測(cè)定試劑盒提供G-或F-肌動(dòng)蛋白加陽(yáng)性(α - 肌動(dòng)蛋白)和陰性(牛血清白蛋白,BSA)結(jié)合對(duì)照蛋白。肌動(dòng)蛋白結(jié)合發(fā)生在對(duì)肌動(dòng)蛋白的任何部位具有親和力時(shí)。可以通過(guò)使用降速法測(cè)量F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合。以這種方式,離心用于通過(guò)差異沉降將F-肌動(dòng)蛋白與G-肌動(dòng)蛋白分離。F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白將與肌動(dòng)蛋白絲共沉淀并在離心管底部形成沉淀。可以檢測(cè)具有F-肌動(dòng)蛋白成束活性的蛋白質(zhì),因?yàn)樗鼈儗?dǎo)致F-肌動(dòng)蛋白以比正常更低的離心力沉降(14,000xg對(duì)150,000xg)。F-肌動(dòng)蛋白切斷蛋白,G-肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白或非肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白將留在上清液中。如果上清液中殘留的G-肌動(dòng)蛋白比陰性對(duì)照樣品中的G-肌動(dòng)蛋白更多,則可以預(yù)期切斷蛋白質(zhì),并且應(yīng)該通過(guò)在添加測(cè)試蛋白質(zhì)之前和之后測(cè)量F-肌動(dòng)蛋白長(zhǎng)度分布來(lái)進(jìn)一步測(cè)試該活性。G-肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白可以通過(guò)將測(cè)試蛋白添加到G-肌動(dòng)蛋白并誘導(dǎo)聚合來(lái)測(cè)量,如果測(cè)試蛋白螯合G-肌動(dòng)蛋白,那么在旋轉(zhuǎn)測(cè)定期間,與對(duì)照相比,肌動(dòng)蛋白將留在上清液中。

肌動(dòng)蛋白可以以兩種形式存在:球狀亞單位(G-肌動(dòng)蛋白)和絲狀聚合物(F-肌動(dòng)蛋白)(有關(guān)更多信息,請(qǐng)參見關(guān)于肌動(dòng)蛋白頁(yè)面)。兩種形式的肌動(dòng)蛋白都與細(xì)胞中過(guò)多的蛋白質(zhì)相互作用。到目前為止,有超過(guò)50種不同類別的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白(ABP),而且?guī)齑嫒赃h(yuǎn)未完成。肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白允許肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架快速響應(yīng)細(xì)胞和細(xì)胞外信號(hào),并且在許多細(xì)胞過(guò)程中對(duì)細(xì)胞骨架參與是*的。這些包括細(xì)胞形狀和運(yùn)動(dòng),肌肉收縮,細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸,細(xì)胞發(fā)病機(jī)理和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。

該試劑盒含有非肌肉肌動(dòng)蛋白(Cat。#APHL99)。同樣的試劑盒也可用于骨骼肌肌動(dòng)蛋白(Cat。#AKL99),參見Cat。#BK001。骨骼肌肌動(dòng)蛋白旋轉(zhuǎn)試劑盒可能更適合用于研究來(lái)自肌肉組織的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白。

試劑盒內(nèi)容
該試劑盒包含足夠的材料,可根據(jù)檢測(cè)體積進(jìn)行30-100次檢測(cè)。包括以下試劑:

00001. 8 x250μg非肌肉肌動(dòng)蛋白(Cat。#APHL99)。

00002. α- Actinin,陽(yáng)性對(duì)照(Cat。#AT01)。

00003. BSA,陰性對(duì)照

00004. 一般肌動(dòng)蛋白緩沖液(Cat。#BSA01)。

00005. 肌動(dòng)蛋白聚合緩沖液(Cat。#BSA02

00006. F-肌動(dòng)蛋白緩沖液。

00007. ATP,100 mM(Cat。#BSA04

00008. EGTA,0.5米

00009. 的MgCl 2,100毫

00010. Tris-HCl pH 6.5,1.0M

00011. Tris-HCl pH 7.5,100mM

00012. 手冊(cè)詳細(xì)的協(xié)議和廣泛的故障排除指南

需要的設(shè)備

00001. 離心設(shè)置能夠在4°C和24°C下容量為150,000 xg,體積容量為50-200μl。

00002. SDS-PAGE系統(tǒng)。

00003. 感興趣的蛋白質(zhì)的檢測(cè)系統(tǒng)(考馬斯有利于純化的蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)印跡或銀染色用于較低純度或低豐度的測(cè)試蛋白質(zhì))。

00004. 用于光密度測(cè)定的凝膠掃描儀。

問(wèn)題1:當(dāng)使用非肌肉肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白生物化學(xué)試劑盒(Cat。#BK013或肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白生物化學(xué)試劑盒Cat。#BK001)時(shí),制備肌動(dòng)蛋白結(jié)合試驗(yàn)蛋白的*條件是什么?

答案1:  在肌動(dòng)蛋白相容緩沖液(如HEPES或磷酸鹽緩沖液)中使測(cè)試蛋白質(zhì)達(dá)到盡可能高的濃度。高濃度(優(yōu)選>20μM)是優(yōu)化檢測(cè)肌動(dòng)蛋白和測(cè)試蛋白之間相互作用的機(jī)會(huì)所必需的。在某些情況下,K d肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白/肌動(dòng)蛋白相互作用的(解離常數(shù))可以低到不能通過(guò)顆粒的蛋白質(zhì)測(cè)定檢測(cè)到; 然而,對(duì)于肌動(dòng)蛋白在反應(yīng)混合物中的影響可能足以通過(guò)沉淀和上清液中的肌動(dòng)蛋白量與陰性對(duì)照的差異來(lái)檢測(cè)。我們還建議將測(cè)試蛋白質(zhì)在150,000 xg下在4°C下離心1小時(shí),以去除變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片。如果已經(jīng)采取其他步驟(例如親和柱純化)來(lái)純化測(cè)試蛋白,則這不是必需的。高速離心后,取出上清液置于冰上。這是測(cè)試蛋白質(zhì)原料。

 

總離子強(qiáng)度應(yīng)低于50 mM,這是由于肌動(dòng)蛋白結(jié)合的特性,因此它主要是離子的,因此會(huì)受到中鹽和高鹽緩沖液的影響。一個(gè)好的起始緩沖液是20 mM Hepes pH 7.4加20 mM KCl,加上蛋白酶抑制劑,磷酸酶抑制劑和任何必要的輔助因子。可以用20mM MgCl 2和10mM ATP 制備低鹽肌動(dòng)蛋白聚合10x緩沖液,從而使鹽在終反應(yīng)中保持低水平。 

 

需要考慮的其他問(wèn)題是(i)測(cè)試蛋白輔助因子可能是必需的,(ii)測(cè)定中的因子可能是主動(dòng)抑制相互作用,(iii)測(cè)試蛋白可能偏愛不同類型的肌動(dòng)蛋白,或( iv)測(cè)試蛋白質(zhì)在組織提取物中可以是低濃度的。

 

為了解決這些潛在問(wèn)題中的一些,可以添加試劑以去除抑制劑,例如用于鈣的EGTA(部件號(hào)BSEG-01)。在運(yùn)動(dòng)蛋白的情況下,ATP / Mg2 +組合將使運(yùn)動(dòng)與F-肌動(dòng)蛋白解離,因此以1mM使用不可水解的類似物如AMPPNP。肌動(dòng)蛋白親和柱可用于濃縮和分離更多的測(cè)試蛋白。后,不同的pH條件可以改善肌動(dòng)蛋白和肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白之間的結(jié)合(例如,α-輔肌動(dòng)蛋白的適pH為7.0)。

 

問(wèn)題2:非肌肉肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白生物化學(xué)試劑盒(Cat。#BK013)可用于測(cè)定非肌肉肌動(dòng)蛋白和肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白之間的結(jié)合親和力嗎?

答案2:   結(jié)合親和力(K d)可以通過(guò)旋轉(zhuǎn)降低測(cè)定來(lái)估計(jì),通過(guò)滴定測(cè)試蛋白質(zhì)濃度在0.2和20μM之間,并找到原始蛋白質(zhì)在顆粒中的一半的濃度。繪制百分比測(cè)試蛋白質(zhì)結(jié)合對(duì)比反應(yīng)中的原始濃度以獲得以μM計(jì)的Kd。

 

問(wèn)題3:細(xì)胞裂解液可以與非肌肉肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白生物化學(xué)試劑盒(Cat。#BK013)一起用作測(cè)試蛋白的來(lái)源嗎?

答案3:是的,細(xì)胞裂解液可用作測(cè)試蛋白的來(lái)源。然而,細(xì)胞骨架不建議這樣做,因?yàn)榈鞍踪|(zhì)的純度和濃度通常太低而不能與肌動(dòng)蛋白相互作用。此外,裂解物將含有額外的輔助蛋白和多種磷酸酶和蛋白酶,它們可以干擾或改變肌動(dòng)蛋白和肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白之間的相互作用。如果要使用裂解物,我們建議如下:

 

盡管該試劑盒設(shè)計(jì)用于純蛋白質(zhì)或化合物,但一些研究人員已經(jīng)添加了具有良好結(jié)果的提取物。通常研究人員使用過(guò)表達(dá)的蛋白質(zhì)和類似過(guò)表達(dá)的野生型對(duì)照提取物。需要制備10mg / ml蛋白質(zhì)提取物,然后將其1/3體積用于1mg / ml的2/3體積的肌動(dòng)蛋白。以這種方式,存在足夠高的蛋白質(zhì)濃度以指示結(jié)合。提取緩沖液應(yīng)為20mM Hepes緩沖液pH 7.4,20mM NaCl,加上蛋白質(zhì)的任何輔因子,以及蛋白酶抑制劑混合物如Cat。#PIC02。也可加入磷酸酶抑制劑。用冰冷的緩沖液沖洗細(xì)胞,用注射器針頭或其他裝置彎曲25g裂解細(xì)胞。pH可以將肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白(ABP)的F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合特性改變0至100%。對(duì)于提取物制備,測(cè)試pH 6.5,7.5和8.5是個(gè)好主意。對(duì)照細(xì)胞系非常關(guān)鍵,因?yàn)闈撛诘腁BP可能通過(guò)其他途徑出現(xiàn)在顆粒中; 例如,變性或與其他細(xì)胞蛋白質(zhì)聚集。總離子強(qiáng)度應(yīng)保持在50 mM以下,以免使任何潛在的ABP脫鹽。

 

抗體

· 概述

· 常見問(wèn)題解答

Cytoskeleton Inc致力于為肌動(dòng)蛋白和肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白提供高質(zhì)量的抗體。我們?cè)谠撓盗挟a(chǎn)品中的所有抗體均經(jīng)過(guò)QC Max™測(cè)試。已經(jīng)測(cè)試QC Max TM抗體用于蛋白質(zhì)印跡,原位和免疫沉淀。這樣,您就可以準(zhǔn)確了解每種抗體的用途,并確保購(gòu)買適合您的抗體。如果您對(duì)我們的QC Max™抗體有關(guān)的詳細(xì)信息,請(qǐng)點(diǎn)擊下面列出的產(chǎn)品以獲取更多詳細(xì)信息。

問(wèn)題1:在細(xì)胞和組織中染色F-肌動(dòng)蛋白的*方法是什么?

答案2:   細(xì)胞骨架提供我們的Acti染色系列熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽,可在固定細(xì)胞和組織樣本中特異性染色F-肌動(dòng)蛋白。Acti染色熒光鬼筆環(huán)肽探針?lè)浅C髁梁头€(wěn)定,為標(biāo)記F-肌動(dòng)蛋白提供了一種非常簡(jiǎn)單和經(jīng)濟(jì)的方法。鬼筆環(huán)肽用不同的綠色和紅色熒光團(tuán)(Cat。#PHDG1,PHDR1,PHDH1和PHDN1)標(biāo)記。也可以使用肌動(dòng)蛋白抗體,但通常那些也染色G-肌動(dòng)蛋白,這產(chǎn)生高背景。

 

問(wèn)題2:您對(duì)多克隆抗肌動(dòng)蛋白抗體有何推薦稀釋度?

答案2:   抗體的稀釋度取決于所使用的細(xì)胞/組織類型和實(shí)驗(yàn)形式。對(duì)于蛋白質(zhì)印跡,我們已經(jīng)測(cè)試并推薦使用濃度為500ng / ml(1:1000稀釋)的抗體。在該稀釋度下,我們?cè)诜侵拮?nbsp;A6細(xì)胞,小鼠Swiss 3T3細(xì)胞,大鼠NRK細(xì)胞,人HeLa細(xì)胞和血小板細(xì)胞的細(xì)胞提取物中檢測(cè)到肌動(dòng)蛋白。對(duì)于免疫熒光,我們使用抗肌動(dòng)蛋白抗體檢測(cè)小鼠Swiss 3T3細(xì)胞中的肌動(dòng)蛋白。抗體以2μg/ ml(1:500稀釋)的濃度使用,然后與1:500稀釋的抗兔羅丹明綴合的第二抗體一起溫育。這些信息通常在圖例中或我們的抗體數(shù)據(jù)表的“產(chǎn)品用途”部分中找到。

 

 

 

貨號(hào)

品名

規(guī)格

品牌

BK165-S

Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK165

Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

BK163-S

Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK163

Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

BK160-S

Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK160

Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

BK162-S

Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK162

Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

BK161-S

Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

(10 assay)

cytoskeleton

BK161

Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

(30 assay)

cytoskeleton

AAC04-Beads

Acetyl-Lysine Affinity Beads

ea

cytoskeleton

APY03-Beads

Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads

ea

cytoskeleton

ASM11-Beads

SUMOylation 1 Affinity Beads

ea

cytoskeleton

ASM24-Beads

SUMOylation 2/3 Affinity Beads

ea

cytoskeleton

UBA01-Beads

Ubiquitination Affinity Beads

ea

cytoskeleton

CIG02-Beads

Acetyl-Lysine Control Beads

ea

cytoskeleton

CIG03-Beads

SUMO1 IP Control Beads

ea

cytoskeleton

CIG01-Beads

IgG Control Beads

ea

cytoskeleton

CUB02-Beads

Ubiquitination Control Beads

ea

cytoskeleton

BLR01

BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit

ea

cytoskeleton

BLR02

BlastR™ Rapid Filtration Kit

ea

cytoskeleton

AAC02

Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1)

ea

cytoskeleton

AAC03

Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

ea

cytoskeleton

AAC03-HRP

Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

ea

cytoskeleton

AAC01

Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20)

ea

cytoskeleton

APY03

Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

ea

cytoskeleton

APY03-HRP

Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

ea

cytoskeleton

ASM01

SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16)

ea

cytoskeleton

ASM24

SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2)

ea

cytoskeleton

ASM23

SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

ea

cytoskeleton

ASM23-HRP

SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

ea

cytoskeleton

AUB01

Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal

ea

cytoskeleton

AUB01-HRP

Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal

ea

cytoskeleton

PHDG1

Acti-stain 488 phalloidin

ea

cytoskeleton

PHDH1

Acti-stain 555 phalloidin

ea

cytoskeleton

PHDN1

Acti-stain 670 phalloidin

ea

cytoskeleton

BK001

Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

ea

cytoskeleton

BK003

Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

ea

cytoskeleton

AKL95

Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AD99

Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle

ea

cytoskeleton

AS99

Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle

ea

cytoskeleton

AKL99

Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AKF99

Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AP05

Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

APHR

Actin protein (rhodamine): human platelet

ea

cytoskeleton

AR05

Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

AT01

Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

RP01P

Arp2/3 protein complex: porcine brain

ea

cytoskeleton

CS-TFC01

Cardiac Thin Filament Complex (CTFC)

ea

cytoskeleton

CF01

Cofilin 1 protein: human recombinant

ea

cytoskeleton

HPG6

Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant

ea

cytoskeleton

MH01

Heavy meromyosin protein

ea

cytoskeleton

CS-MH03

Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment)

ea

cytoskeleton

CS-MYS03

Myosin - cardiac S1 fragment

ea

cytoskeleton

CS-MYS04

Myosin - skeletal muscle S1 fragment

ea

cytoskeleton

CS-MYS05

Myosin - smooth muscle S1 fragment

ea

cytoskeleton

MY02

Myosin II protein: rabbit skeletal muscle

ea

cytoskeleton

MY03

Myosin protein: bovine cardiac muscle

ea

cytoskeleton

PR02

Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant

ea

cytoskeleton

PHDR1

Rhodamine Phalloidin

ea

cytoskeleton

CY-SC001

SiR-Actin Kit

ea

cytoskeleton

CY-SC013

SiR700-Actin Kit

ea

cytoskeleton

VCG03

WASP protein VCA domain: GST tagged: human

ea

cytoskeleton

 

 

 

上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司是實(shí)驗(yàn)試劑一站式采購(gòu)服務(wù)商

1:強(qiáng)大的進(jìn)口輻射能力,血清、抗體、耗材、大部分限制進(jìn)口品等。

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6:我們還是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等幾十家國(guó)外公司授權(quán)代理。

7:我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批發(fā),歡迎合作。

 

上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司
地址:上海浦東川沙鎮(zhèn)川沙路6619號(hào)上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司
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